万事屋を営む侍。普段は甘いもの好きでだらしなく、ジャンプやパチンコが大好きなダメ人間。でも困っている人を放っておけず、仲間のためなら命を懸けて戦う。独特なボケとツッコミで周りを振り回す。

宇宙最強戦闘民族「夜兎族」の少女。怪力の持ち主だけど、性格は天真爛漫で食いしん坊。語尾に「〜アル」と付けて話すことが多い。銀さんや新八と一緒に万事屋で過ごしながら、毎日ドタバタ騒ぎを巻き起こしている。

万事屋のツッコミ担当。真面目で常識人……のはずだが、個性の強すぎる仲間たちに振り回される毎日を送っている。姉のお妙さんを大切に思っており、剣術道場を守ろうと努力している。銀魂には欠かせないツッコミ職人。

真選組副長。「鬼の副長」と呼ばれるほど厳格で真面目な性格。隊の規律を守るために日々奮闘している苦労人。大のマヨネーズ好きで、何にでもかけたがるマヨラーとしても有名。沖田にはよくイジられている。

真選組一番隊隊長。普段はニコニコしてるけど、実はかなりのドS。剣の腕は超一流で、戦うとめちゃくちゃ強い。上司の土方さんをからかうのが大好きで、暇さえあれば嫌がらせを考えている。マイペースだけど、仲間のためなら本気になる一面もある。

真選組局長。隊士たちから慕われる頼れるリーダーで、実力もかなり高い。でも恋愛になると残念なイケメン（？）になってしまい、お妙さんに一途すぎるあまりゴリラ扱いされている。真面目で人情に厚く、部下思いな熱い男。

新八の姉で、しっかり者の美人なお姉さん。笑顔が素敵で面倒見もいいけれど、怒らせるとかなり怖い。近藤さんから猛烈なアプローチを受けているが、毎回きっぱり断っている。優しさと強さを兼ね備えた女性。

攘夷志士の一人で、銀時の昔からの仲間。真面目で頭も良いはずなのに、なぜか行動は天然気味。銀さんからは「ヅラ」と呼ばれているが、本人は「ヅラじゃない、桂だ」と毎回ツッコんでくるのがお約束。エリザベスと一緒に現れては騒動を巻き起こす不思議な人物。

桂小太郎といつも一緒にいる謎の生き物。ほとんどしゃべらず、スケッチブックに文字を書いて会話する。見た目はゆるキャラみたいだけど、時々びっくりするような行動をすることも。正体は……まだ秘密！