特徴：最高速度マッハ20で動くことができる正体不明のタコ型生物。月の70%を破壊し、地球を破壊すると宣言したが、大人の事情で椚ヶ丘中学校3年E組の担任を務めることになる。 役割：優れた教育観と能力で、落ちこぼれ扱いされていたE組の生徒たちを精神的、学業的に成長させる最高の師匠である。 性別：男

烏間惟臣：防衛省所属のエージェントで、生徒たちに実戦的な暗殺技術と体力を教える、厳格で頼りがいのある体育教師である。 性別：男

イリーナ・イェラビッチ：ハニートラップを得意とする天才暗殺者で、当初は刺々しかったが、次第に子供たちと打ち解けていく愉快な英語教師である。 性別：女

赤羽業：明晰な頭脳と圧倒的な喧嘩の実力を兼ね備えた天才であり、殺せんせーに初めてダメージを与えた少年である。 性別：男

潮田渚：一見弱そうに見えるが、相手を一瞬で制圧する天賦の暗殺の才能を秘めた本作の主人公である。 性別：女の子のような男の子

特徴：E組の男子学級委員長で、端正なルックスと誠実な人柄を兼ね備えた「完璧なイケメン」である。貧乏な家計を助けるためにアルバイトをしていたことが原因でE組に落とされた。 役割：優れたリーダーシップでクラスメイトを一つにまとめる精神的支柱である。 コードネーム：貧乏委員長 性別：男

千葉龍之介：目を覆う長い前髪が特徴の、静かで寡黙な性格の少年。前髪に隠れているが、実はかなりの美形という設定がある。遠距離狙撃に特化したE組最高の主砲である。空間計算能力に長け、障害物の多い複雑な地形でも目標を正確に射抜く。速水凛香と最高のコンビを組み、後方支援を担当する。性別：男 速水凛香：口数が少なくクールで冷淡に見えるが、内面はツンデレ気味な猫のような少女。優れた空間知覚能力と揺るぎない照準力を持つ。特に動く目標を正確に捉える動体視力とスナップショット（瞬間射撃）に独歩的な才能を見せる。優れた機動性を活かし、狙撃手としての役割を完璧に遂行する。性別：女

片岡メグ：E組の女子学級委員長で、責任感が強く水泳をはじめとする運動全般に長けた男勝りな少女。 中村莉桜：学年上位の英語力を持ち、いたずら好きで渚をよくからかう女子生徒。 倉橋陽菜乃：生物や昆虫が大好きで、屈託のない明るく純粋な性格をしたクラスのムードメーカー。 岡野ひなた：器械体操部出身で体が非常に柔らかく、ナイフを用いた近接格闘に長けている。 矢田桃花：人当たりが良く愛嬌のある性格でビッチ先生を慕っており、交渉や交渉術に才能がある。 不破優月：漫画や小説が大好きで、推理力に優れ探偵役をよく務める。 原寿美鈴：母性溢れるふくよかな体型の少女で、料理の腕前が非常に高くクラスの食を支える。 奥田愛美：正直で純粋な性格の科学の天才で、化学式や薬品調合において独歩的な才能を持つ。 矢口美奈実：アニメオリジナルキャラクター出身で、舞台演出やサポート役を主に務める。

茅野カエデ：E組のムードメーカー役を務める明るい少女だが、後半の大きな反転の鍵を握る人物である。 性別：女 コードネーム：永遠の0（胸のサイズ）

前原陽斗：優れた運動神経を持ち、クラスで一番モテるプレイボーイなイケメン。 寺坂竜馬：大柄で粗暴な性格だが、物語が進むにつれてクラスのために先頭に立つ義理堅い男へと成長する。 村松拓哉：実家がラーメン屋を営んでおり、料理に関心が高く、主に寺坂グループと行動を共にする。 吉田大成：バイク好きのメカオタクで、寺坂グループの一員。 杉野友人：野球部出身で活発な性格。渚の親友であり、神崎に片想いをしている。 竹林孝太郎：眼鏡をかけた情報収集家スタイルで、メイドカフェや二次元文化を好むオタク。 岡島大河：クラスで最も煩悩にまみれているが、カメラ撮影に関してはプロ級の腕前を持つ。 三村航輝：映像編集や演出に優れた才能を持ち、クラスの映像制作を主導する。 菅谷創介：芸術的センスが非常に高く、変装用メイクや造形物制作で活躍する。 木村正義：クラスで最も足が速いスピードスターで、自分の本名（ジャスティス）にコンプレックスがある。 堀部イトナ：かつて殺せんせーの弟を自称していたが、現在は機械工作に長けた生徒となった。