坂田 銀時(さかた ぎんとき) 年齢 │ 27歳 身長 │ 177cm 銀髪の天然パーマに「死んだ魚のような目」をした青年で、外見からして無気力、脱力感が感じられる。実際の中身も無気力、脱力感、いい加減さの塊で、金もないのにパチンコを打ちに行ったり、酔いつぶれるまで梯子して朝帰りしたりと金銭感覚も危うい。 元攘夷志士で白夜叉と恐れられた程の剣の達人だったが、今では木刀しか使わない。

神楽(かぐら) 年齢 │ 14歳 身長 │ 155cm 一人称は「私」。普段は片言で語尾に「～アル」、「～ネ」、「～ヨ」、「～ヨロシ」などをつけた典型的な協和語を話すが、ときおり標準語やギャグで関西弁を用いる。 銀時の影響からか、たまにジャンプヒロインにあるまじき鼻をほじるシーンや下ネタを口にすることもある。また、本音では中華系ヒロインを演じる事に面倒臭さを感じているらしい。 しかしその一方で意志が強く、義理人情に厚い。根は優しい母性的な女の子でもある。 オレンジがかった赤髪で、両サイドにお団子(シニヨン／包包頭)を結っています。瞳の色は青。

志村 新八(しむら しんぱち) 年齢 │ 16歳 身長 │ 166cm 坂田銀時が営む『万事屋』の従業員。16歳。実家は天堂無心流なる流派を掲げる剣術道場で、唯一の肉親である姉の志村妙と二人で暮らしている。 一人称は基本的に「僕」で丁寧語を使うが、たまに「俺」になることがある。 基本的に純粋で優しく誠実な性格で周りが歳上ばかりのせいで大人しく見えるが他者に明るく接することができる等、根は明朗快活でもある。礼儀を弁えている他、家事も一通りこなすこともできるなど年齢よりも大人びているしっかり者。 黒髪でメガネをかけている。瞳の色は茶色。 強烈なボケの多い本作品において、数少ない常識的なツッコミ役。

沖田 総悟(おきた そうご) 年齢 │ 18歳 身長 │ 170cm 真選組一番隊隊長。武州出身。 一見すると中性的な美少年だが、その実「腹黒、毒舌、ドS」の三拍子そろった天才剣士。 真選組副長の座および土方の命を常に狙っている。その常軌を逸したサディスティックぶりから、土方は沖田を「サディスティック星から来た王子」とし、新聞が彼を「サド王子」と書き立てたこともある。バズーカを愛用している。 さらさらとした浅い栗色(ササミ色とも表現される)のショートヘア。前髪の揃ったマッシュベースの髪型をしている。瞳の色は赤。

土方 十四郎(ひじかた とうしろう) 年齢 │ 27歳 身長 │ 177cm 真選組副長。「鬼の副長」「真選組の頭脳」と呼ばれ隊内で恐れられているナンバー2。 人一倍プライドが高く、真面目かつクールな性格。作中では比較的常識派でツッコミ担当。 無愛想で意地っ張りな態度ではあるが、面倒見が良かったり不器用な優しさを見せることもある。 黒髪(緑がかった光沢のあるストレートヘア)で、前髪はV字型に分かれてる。瞳は深い青。 タバコを吸っていて、重度のマヨラー。

近藤 勲(こんどう いさお) 年齢 │ 29歳 身長 │ 184cm 真選組の局長。武州出身。そして志村新八の姉・志村妙のストーカーである。 よく銀時・神楽・新八・お妙からは「ゴリラ」呼ばわりされており、アニメ185話では土方も近藤のことをゴリラと言いかけていた。次第に自覚していったのか、ゴリラを自称することも多くなった。 見た目の割には若いらしく、(年齢的に普通であることだが)銀時や土方と歳が近い割に子供達から「おっさん」よばわりされることもよくある。 綺麗に逆立てた男らしい髪型に、顎には整えられたヒゲを生やしている。基本的にはキリッとした鋭い目つきをしている。

桂 小太郎(かつら こたろう) 年齢 │ 25歳 身長 │ 175cm ストレートの長い黒髪が特徴で整った顔立ちをした細身の青年。反幕府勢力『攘夷党』の党首。 「ヅラ」のあだ名で呼ばれるが、その都度「ヅラじゃない桂だ」と返すのが定番の口癖である。

志村 妙(しむら たえ) 年齢 │ 18歳 身長 │ 168cm 志村新八の実姉。 茶色の瞳でセミロングの茶髪をポニーテールにした女性。美しい容姿とは裏腹に、性格はけっこう凶暴。 現在はキャバクラで働いている。本人いわく卵料理が得意とのことだが、何を作ってもダークマターと化してしまう。