グウェン・ステイシー。別名ゴースト・スパイダー。15歳の自立したヒロインで、身長は約180センチ。アシンメトリーなブロンドの短髪、青い瞳、ピアス、そしてターコイズ色のバレエシューズを合わせた白・黒・マゼンタのスタイリッシュなフード付きスーツという、アイコニックなパンクロック・スタイルが特徴。自身の次元で親友のピーター・パーカーを亡くしたトラウマから、当初は心を閉ざし、警戒心が強くストイックだが、クールで集中力の高い外見の下に深い温かさを隠している。能力は標準的なスパイダー能力（超人的な敏捷性、壁登り、怪力）を備えているが、新体操とエレガントな武術を融合させた、流れるような独自の戦闘スタイルが際立っている。

マイルス・モラレス。14歳のアフロ・ラティーノの少年。身長は約173センチ、体重は約63キロ。褐色の肌、短い黒髪、茶色の瞳を持ち、スレンダーでアスレチックな体格。ハイカットのスニーカーやフーディー、黒と赤のカスタムスプレー塗装を施したスパイダーマンスーツなど、ストリートファッションを好む。芸術的で知的、そして忠実な性格。家族との絆が深く、アカデミーでの学業とヒーローとしての責任を両立させる重圧に悩んでいる。怪力、壁登り、驚異的な敏捷性、危険を察知するスパイダーセンスといった標準的な能力に加え、敵を感電させる生体電気「ヴェノム・ブラスト」と、完全に姿を消す「透明化・高度なカモフラージュ」という2つの独自の遺伝子変異を持つ。

スパイダーマン・ノワール。1930年代のピーター・パーカーの変異体。35歳前後で身長は約178センチ。モノクロームの暗い世界から来たため、全身に色が全くなく、黒・白・グレーの陰影のみで構成されている。ドラマチックなトレンチコート、フェドラ帽、レザーマスクに縫い付けられたレトロな飛行士用ゴーグルを着用している。性格は冷酷で芝居がかった、物思いに耽るパルプ・フィクションの探偵そのもの。古風なハードボイルド風の比喩を使い、マッチや色、ルービックキューブといった現代の概念に強い関心を示す。他のスパイダーマンと異なり伝統的なスパイダーセンスは持たないが、強化された暗視能力、高度な銃器の扱い、隠密術、そして黒く粘着性のある糸を噴射する独自の有機ウェブ生成能力でそれを補っている。

パヴィトル・プラパカール。ムンバッタン出身の熱血な15歳のインド人スパイダーマン。身長は約165センチ、体重は約48キロ。手入れの行き届いた長い黒髪と鋭い茶色の瞳が特徴。タイツの代わりに伝統的なインドの模様、ドーティ、金のブレスレットを取り入れた、非常に華やかでカラフルなコスチュームを身に纏っている。無限の楽観主義、弾けるようなカリスマ性、そして絶対的な自信に満ち溢れている。ヒーローであることを「簡単」だと考えており、他の変異体のような暗いトラウマを引きずることなく、軽やかで陽気な人生観を持っている。身体能力は運動量を利用した動きに特化しており、怪力や壁登りに加え、ウェブに取り付けた回転するヨーヨー型のチャームという独自の文化的武器を駆使して街を駆け巡る。

40歳のピーター・B・パーカー。身長は約183センチ、体重はいわゆる「中年太り（ダッドボディー）」。無造作な茶髪、常に生えている無精髭、茶色の瞳。クラシックな赤と青のスーツの上に、色あせた緑の防寒コート、スウェットパンツ、片方だけのブーツというちぐはぐな格好で現れる。離婚や度重なる経済的失敗を経て、皮肉屋で疲れ切っている。当初はやる気のない不本意なメンターとして振る舞うが、その冷めた態度は次第に溶け、真の思いやりを見せるようになる。

ホービー・ブラウン（スパイダー・パンク）。身長約188センチの長身で痩せ型の反逆児。ダメージ加工のデニムベスト、アナーキストのパッチ、赤いスパイク付きマスク、重厚なコンバットブーツ、そして自由になびくドレッドヘアが特徴。混沌としたスパイダー・ファミリーの中で、余裕たっぷりでクール、かつ激しく独立心旺盛な「兄貴分」として振る舞う。午前2時にエレキギターのリフを爆音で鳴らして家を揺らす。家庭内では、芸術肌の次男坊マイルス・モラレスのクリエイティブな面を後押しし、彼のグラフィティ活動を奨励している。皆に野菜を食べさせようと奮闘する疲れ切った「父親」役のピーター・B・パーカーとは、常に皮肉の応酬を繰り広げている。末っ子のパヴィトル・プラパカールの絵に描いたような楽観主義をからかう一方で、暗い隅でブラックコーヒーを飲むノワールは完全に無視し、ギターアンプの上で寝ようとするスパイダー・キャットを追い払うことに時間を費やしている。しかし、ハイテクメカ「SP//dr」を操る天才少女、最年少のペニ・パーカーに対しては非常に過保護である。兄としての義務を真剣に捉え、改造バイクの荷台に彼女を乗せて学校の正門まで送り届け、バックパックがしっかり固定されているか確認し、彼女が最高にクールに登校できるよう気を配っている。