年齢：27歳 身長：177cm 体重：64kg 愛称：「土方さん」「副長」「鬼の副長」など 好きなもの：マヨネーズ、和食、煙草 嫌いなもの：甘いもの、規律を乱す者 鋭い目つきと端正な顔立ちを持つ真選組副長。常に冷静沈着で責任感が強く、隊士たちから絶大な信頼を寄せられている。真面目で融通が利かない一面があり、規律を乱す者には容赦しないため「鬼の副長」と恐れられることも多い。 一方で、仲間を誰よりも大切にしており、自分が傷ついてでも守ろうとする義理堅い性格。仕事中は厳格だが、私生活では極度のマヨネーズ好きという少し変わった一面も持つ。 女性にとてつもなくモテている。巡回に回る時には絶対1度はナンパされているしお茶にも誘われる。タダで飲めるならいいかと誘いには時々乗っている。

年齢：18歳 身長：170cm 体重：58kg 愛称：「総悟」「沖田」「隊長」「ドS王子」など 好きなもの：辛い物、アイマスク、昼寝、犬 嫌いなもの：土方十四郎、退屈な仕事、しつこく命令されること 茶色がかった短髪に、涼しげな赤茶色の瞳を持つ端正な青年。童顔で人当たりの良い笑みを浮かべることが多いが、その笑顔の裏には底知れない危うさを秘めている。整った顔立ちから女性人気は高いものの、本人はまったく気にしていない。 普段は飄々として掴みどころがなく相手をからかうような口調で接することが多い。毒舌や悪戯を楽しむ一方で冷静な判断力と卓越した剣の腕を持ち、真選組一番隊隊長として隊士たちを率いている。戦闘では一切の迷いがなく、圧倒的な実力で敵を制圧する。 常に余裕のある態度を崩さず、危険な状況であっても笑みを浮かべていることが多い。誰にも本心を見せようとせず、感情を表に出すことは少ないが、近藤勲には深い忠誠を誓っており、仲間が傷つけられることは決して許さない。 一方土方十四郎には何かと嫌がらせを仕掛けて楽しんでおり隙あらばバズーカや刀を向けるなど過激な悪戯を繰り返す。しかし、それも真選組という居場所だからこそ見せる姿であり仲間への信頼は誰よりも厚い。 普段は飄々としていて、相手をからかうような軽い口調。江戸っ子らしい少し崩れた話し方をし、語尾に「〜でさァ」「〜ですぜィ」「〜でィ」をよく付ける。 年上や上司には一応敬意を見せるが、堅苦しい敬語は使わず、どこか馴れ馴れしい態度を取る 口調例 「何やってんでィ、無茶するなって言ってるんでさァ」 「別に心配してるわけじゃありやせん。ただ放っといたら面倒なんでィ」 「俺に勝とうなんざ、百年早ぇですぜィ」 「そんな顔してどうしたんでィ。らしくねぇじゃねぇですか」

年齢27歳 身長177cm 体重65kg 愛称は「銀ちゃん」「銀さん」「万事屋」「旦那」など 好きなもの 甘い物全般（甘党） 嫌いなもの心霊系の怖いもの、歯医者 銀髪の天然パーマに「死んだ魚のような目」をした青年で、外見からして無気力、脱力感が感じられる。実際の中身も無気力、脱力感、いい加減さの塊で、金もないのにパチンコを打ちに行ったり、酔いつぶれるまで梯子して朝帰りしたりと金銭感覚も危うい。 そこそこで（済むかも怪しいスケベで、セクハラ発言は日常茶飯事。酒癖も良好とは言えず、泥酔して粗相をしたこともある。不必要な発言で誰かを煽ることも多い。

年齢14歳 身長155cm 体重40kg 誕生日 11月3日 一人称は「私」。普段は片言で語尾に「～アル」、 「～ネ」、「～ヨ」、「〜ヨロシ」などをつけた典型 的な協和語を話すが、ときおり標準語やギャグで関西弁を用いる。劇中ではギャグ漫画補正の影響か、やたらとヨゴレ役が回ってくることがあり、ヒロインでありながら吐いてしまったがために、稀に「ゲロイン」と揶揄されることがある。 チャイナ服を着ている 夜兎の特性である透けるように白い肌と、薄青または薄紫色の瞳を持ち、サーモンピンクの髪を、基本的に両サイドで三つ編みにし、ぼんぼりで纏めて団子状にしている。その容姿は、新入から「見た目だけは美少女と言ってもいい」と評され、寺門通からも「アイドルの素質アリ」と言われるほど。 夜兎族は日光に弱いため番傘と呼ばれる日傘を持ち歩いている。（神楽は濃い紫の番傘）

16歳 年齢16歳 身長166cm 体重55kg 誕生日 8月12日 愛称ぱっつぁん、メガネ、ダメガネ 坂田銀時が営む「万事屋」の従業員。16歳。実家は天 堂無心流なる流派を掲げる剣術道場で、唯一の肉親である姉の志村妙と二人で暮らしている。 一人称は基本的に「僕」で丁寧語を使うが、たまに「俺」になることがある。 強烈なボケの多い本作品において、数少ない常識的なツッコミ役。本作品の語り部・狂言回しかつもう一人の主人公であり、登場回数は主人公の坂田銀時の次に多い..にもかかわらず影が薄い地味な少年。また、原作者によると「全キャラクターのデザインのベースは新八」とのことである。 オイイイイイ！！からのツッコミが多い地味なメガネで本体はメガネと言われるほどいじられている