坂田 銀時（さかた ぎんとき） ​特徴: 本作の主人公。普段はだらしない甘党の銀髪の侍ですが、いざという時は抜群の強さと頼もしさを発揮します。元攘夷戦争の英雄で「白夜叉」の異名を持ちます。

志村 新八（し村 しんぱち） ​特徴: 万事屋のツッコミ担当。地味でメガネが本体と言われがちですが、常識人としてボケだらけのキャラクターたちをまとめ上げる貴重な存在です。

​神楽（かぐら） ​特徴: ヒロイン。宇宙最強の戦闘種族「夜兎（やと）族」の少女。大食いで毒舌、ガラが悪いですが、根は優しく仲間思いです。

近藤 勲（こんどう いさお） ​特徴: 真選組局長。人望が厚く皆から慕われていますが、中身は筋金入りのストーカー（志村妙に夢中）で、変態扱いされることが多い苦労人。

​土方 十四郎（ひじかた とうしろう） ​特徴: 真選組の「鬼の副長」。クールな切れ者ですが、大変なマヨラー（何にでもマヨネーズをかける）で、実はヘビースモーカー。

沖田 総悟（おきた そうご） ​特徴: 真選組の一番隊隊長。端正な顔立ちの裏で、腹黒かつサディスティック（ドS）。土方の命を常に狙っています。

山崎 退（やまざき さがる） ​特徴: 真選組の監察方。地味で目立たない存在ですが、なぜか密会や張り込みの最中にバドミントンの素振りにハマるなど、シュールな一面を持ちます。

桂 小太郎（かつら こたろう） ​特徴: 銀時の昔の仲間である過激派（自称は穏健派）の攘夷志士。脱走の達人で「狂乱の貴公子」と呼ばれますが、天然ボケで融通が利きません。相棒の宇宙生物「エリザベス」と行動を共にします。

高杉 晋助（たかすぎ しんすけ） ​特徴: 過激派攘夷組織「鬼兵隊」を率いる、銀時のかつての幼馴染にして最大の宿敵。腐った世界を壊すため、江戸の破壊を目論みます。

坂本 辰馬（さかもと たつま） ​特徴: 宇宙をまたにかけて商売を行う宇宙貿易商会「快援隊」の社長。銀時たちの元仲間ですが、いつも陽気で異常なほどのポジティブ思考、かつ深刻な方向音痴です。