頼まれた事は何でもやる万事屋のリーダー。甘いものを定期的に取らないとイライラするほどの甘党。普段は無気力、脱力の人だが、実は凄腕の侍。元攘夷志士で「白夜叉」と恐れられた程の剣の達人だったが、今では木刀しか使わない。愛車はスクーター。

宇宙最強の戦闘民族「夜兎族」の少女。江戸に来れば大金がつかめるとはるばる地球へやっては来たが、、ヤクザの用心棒をさせられていた。それが嫌になって逃げ出したところ、銀時に出会う。故郷に帰る為のお金を貯めるため、万事屋の押しかけバイトとなる。可愛い顔をしているが、大食らいで乱暴、毒舌。語尾に「～アル」「～ネ」「～ヨロシ」「～ヨ」が付く。 定春 神楽が拾ってきた、犬のような巨大宇宙生物。よく人に噛み付くが、神楽が力でねじ伏せていることにより、ペットとなりえている。

父を亡くした上に、廃刀令による影響で完全に廃れてしまった剣術道場の息子。フリーターをしていたが、実はレジ打ちも満足に出来ない。銀時に借金取りから姉を救ってもらったことから、彼の魂を学ぼうと万事屋で働き始める。しかし、すぐに後悔する事になるのだが…。人気上昇中のアイドル・寺門通ちゃんの親衛隊の隊長という一面を持つ。作品随一のツッコミ役だが、最近はボケることもしばしば。

クールな真選組副長。局中法度を定め、ひとたび刀を抜けば「鬼の副長」と呼ばれ、テロリストはもちろん隊士たちからも恐れられる男。ヘビースモーカーで重度のマヨラー。妖刀「村麻紗」によって生まれた第二の人格「トッシー」に支配されたことも。

真選組随一の剣の使い手。爽やかな外見に反して、腹黒い内面の持ち主。バズーカを愛用し、副長の座を狙っている。なにかにつけては職務をサボろうとする。性格はドS。語尾に「～でさァ」「～でィ」などが付く。

かつて銀時たちと共に攘夷(天人との戦)で活躍し、現在も天人を打ち払い再び侍の国を立て直そうとする、攘夷派過激浪士。愛称はヅラ。ヅラと呼ばれたら「ヅラじゃない、桂だ」と返す。 エリザベス 桂のペット。実は口から砲撃できたり、主人の不在にも見事に対応する生存本能を備えていたりと、キュートで高スペックな地球外生物だ。坂本が桂のもとに置いていったものだが、いろんな意味で謎。すそ（？）から時おり見える足や、ごくまれに発するドスの効いた声がまた謎を呼ぶ。

天人が支配する世の中を敵視し、武装集団・鬼兵隊を率いてテロを画策する危険人物。銀時や桂とは旧知の仲だが、攘夷戦争後に袂を分かち現在に至る。銀時や桂と同様、人を引きつける不思議なカリスマ性を持っている男。

攘夷戦争で銀時たちとともに戦った同志だが、貿易の利益で地球人・天人の関係を調整しようと「快援隊」を設立。細かいことは気にせずに大義を貫く気概を持ち、多くの隊員を集めている。が、重大なこともまったく気にしない重度の天然ボケでもある。いつも「アハハハハ！」と笑っている。土佐弁。

新八の姉。美しい容姿とは裏腹に、性格はけっこう凶暴。財政の厳しい道場を支えるため、現在はキャバクラで働いている。客として来た真選組の局長・近藤から、執拗に結婚を迫られている。本人いわく「卵料理が得意」とのことだが料理の腕は壊滅的で、何を作っても「ダークマター（暗黒物質）」と化してしまう。

元は江戸幕府お抱えのエリート忍者・お庭番衆だったが、現在は始末屋として裏家業をこなしている。とあるきっかけで銀時に惚れ込み、しつこく追い続けるものの非常にぞんざいにあしらわれている。しかしながら、そんな現状を非常に楽しんでいるドＭの人。愛称はさっちゃん。