性別：男。マイルス・モラレスはブルックリン出身の10代のスパイダーマンである。蜘蛛に噛まれて超能力を得ており、電気攻撃や透明化、壁登り、蜘蛛の糸などの能力を使用する。善良な性格。

性別：女。グウェン・ステイシーはスパイダーウーマンとして活動するキャラクターだ。蜘蛛に噛まれたことで超能力を得ており、素早い動きと蜘蛛の糸、壁登りなどの能力を使用する。マイルスと同じ10代。

性別：男。ピーター・B・パーカーは『スパイダーマン：スパイダーバース』に登場するスパイダーマンだ。長年ニューヨークを守ってきたベテランヒーローだが、様々な事件を経て疲れ果て、自信を失った状態だった。その後、マイルス・モラレスと出会うことで、再びスパイダーマンとしての責任と希望を取り戻す。優れた戦闘能力とスパイダーセンス、超人的な力と敏捷性、壁登りと蜘蛛の糸を使用する能力を持っている。大人。

性別：男。スパイダーマン・ノワールは『スパイダーマン：スパイダーバース』に登場するスパイダーマンだ。1930年代の暗黒の世界で活動する探偵のようなスパイダーマンで、黒いコートと帽子、マスクを着用している。他のスパイダーマンと同様に優れた身体能力と壁登り、スパイダーセンスを持っており、蜘蛛の糸を使って敵と戦う。口数が少なく真面目な性格で、暗い雰囲気が特徴だ。大人。

性別：男。『スパイダーマン：スパイダーバース』に登場する豚の姿をしたスパイダーマンだ。本名はピーター・ポーカーであり、アニメのように誇張された動きとユーモアを交えて戦う。超人的な力と敏捷性、壁登り、蜘蛛の糸などの能力を持っており、様々な物を取り出して攻撃するカートゥーンのような能力も見せる。

性別：女。『スパイダーマン：スパイダーバース』に登場するスパイダーマンのキャラクターだ。日本のアニメスタイルの世界で活動し、巨大ロボット「SP//dr」を操縦する。ペニーはロボットと精神的に連結して共に戦い、優れた操縦技術と素早い判断力を見せる。明るく活発な性格だが、危機的状況では冷静に行動する姿を見せる。

ホービー・ブラウンは『スパイダーマン：アクロス・ザ・スパイダーバース』に登場するスパイダー・パンクだ。イギリス出身のスパイダーマンで、パンク・ロックスタイルのギターと独特のファッションを好む。自由奔放で反抗的な性格であり、権威に従うことを嫌う。優れた戦闘能力と蜘蛛の糸、壁登り、スパイダーセンスを使用し、ギターを武器として活用することもある。マイルスを助けながらも、自分のやり方で行動する独特なキャラクターだ。

性別：男。『スパイダーマン：アクロス・ザ・スパイダーバース』に登場するスパイダーマンだ。未来のスパイダーマンであるスパイダーマン2099として活動し、スパイダー・ソサエティを率いる人物だ。優れた力と速度、敏捷性、スパイダーセンスを持っており、指の鉤爪のような爪と鋭い牙も特徴だ。真面目で冷徹な性格で、スパイダーマンたちの世界を守るために尽力している。大人。

パヴィトル・プラパカールは『スパイダーマン：アクロス・ザ・スパイダーバース』に登場するスパイダーマン・インディアだ。インドのムンバッタンで活動し、華やかな服装と自信に満ちた性格が特徴だ。優れた敏捷性と反射神経、壁登りと蜘蛛の糸を利用して敵と戦う。当初は自分ですべてを解決できると考えているが、マイルスと共に事件を経験することで、責任感と真のヒーローの意味を悟ることになる。

スポットは『スパイダーマン：アクロス・ザ・スパイダーバース』の主要なヴィランだ。本名はジョナサン・オーンであり、アルケマックスの科学者として働いていたが、スーパー・コライダーの事故に巻き込まれ、体が黒い斑点と白地で構成された独特の姿に変わる。体にある次元ポータルを自在に作り出して瞬間移動したり、攻撃を回避したりすることができ、ポータルを利用して他の次元へ移動することも可能だ。最初は滑稽で弱そうに見えるが、次第に強力な存在へと成長し、マイルスにとって大きな脅威となる。