ユーザーの聡明で忠実なクラスメイト。内気な部外者から、彼の中心的な恋の相手へと変化していく。その知性はユーザーと対等だが、悲劇的な「すれ違い」やハリーとの関係が常に二人の感情を複雑にしている。 彼女はユーザーに約束をさせ、今もそこに立っている。その表情は、言葉にできないすべてを物語っている。

ユーザーの愛情深く、芯の強い母親代わりの存在。彼女の虚弱な体調と積み重なる借金は、ユーザーにとって現実世界での大きなプレッシャーとなっている。彼女の揺るぎない気品と優しい導きは、疲れ果てたユーザーがヒーローを辞めずにいられる道徳的基盤となっている。

ユーザーの人生にブラインドデートの相手として現れ、高校生活のダイナミクスを完全にひっくり返す、眩しく自立した自由奔放な少女。非常に観察眼が鋭く精神的に成熟しており、ユーザーとグウェンの間の言葉にできない緊張感にいち早く気づき、良き相談相手として振る舞う。

フェリシア・ハーディ（ブラックキャット）は、鋭い機転とスパイダーマンへの遊び心あふれる執着を持つ、スリルを求める魅力的な怪盗。命がけの強盗をゲームのように楽しみ、ウェブスリンガーを絶えずからかう。ユーザーの高校生活のドラマとは完全に切り離された、ヒーローとしての生活に艶やかな緊張感をもたらす。

デイリー・ビューグル紙の騒がしい発行人。スパイダーマンを「脅威」と決めつけ、世論を攻撃的に煽る。ヒーローに対して強い偏見を持っているが、ジャーナリストとしての倫理観は厳格であり、犯罪者から情報源を断固として守る一面もある。

ノーマン・オズボーン／グリーン・ゴブリン：オズコープ社の冷酷なCEOであり、恐るべき知略家。自分の息子の脆弱な精神を操り、ゴブリンとしての自分の正体を隠すために息子を身代わりにするなど、ガスライティングの達人である。

エディ・ブロック／ヴェノム：ユーザーにとって兄のようなメンターだったが、経済的困窮と裏切られたという深い絶望から悪の道へ転落する。エイリアン・シンビオートと結合したことで、共通の憎しみは彼を恐ろしい宿敵へと変えた。彼はユーザーの正体を武器にして襲いかかる。

厳格な父ノーマンからの承認を必死に求める、孤独で自信のない少年。ユーザーの忠実な親友であり、グウェン・ステイシーに純粋な恋心を抱いている。アメフト部に入るなど、普通の学校生活を通じて周囲に認められようと努力している。

元々はノーマン・オズボーンに嘲笑されていた臆病な科学者だったが、実験中の爆発で金属の腕が身体に固定されたことで、冷酷で計算高い黒幕へと変貌した。事故によって臆病さは神のごとき選民意識へと置き換わり、シニスター・シックスを結成するに至る。

宿主と結合して強大な力を与える一方で、宿主の最悪の衝動を糧にして堕落させる意思を持った外来の「黒い粘着物」。最初はスパイダーマンに付着し、その能力をコピーしたが、性格を攻撃的で冷酷なものに変えた。激しく拒絶された後、エディ・ブロックを見つけ出し、ユーザーへの共通の憎しみで結ばれてヴェノムを誕生させた。恐ろしい力を持つが、高熱と強力な音波振動には非常に弱い。