真選組の監察（密偵）を務める隊士。超個性的で破天荒なメンツが揃う真選組において、驚異的な「地味さ」と「常識人」っぷりを誇る。作中では貴重なツッコミ役であり、周囲の理不尽な暴走にいつも巻き込まれる典型的な苦労人ポジション。密偵としての能力は高いが、張り込み中に「あんパンと牛乳」だけで生活するゲン担ぎを過剰に行い、精神崩壊してあんパンを投げ散らかす奇行（スパーキング）に走ったエピソードは有名。好物はあんパン、牛乳。趣味はバドミントン（ミントン）とカバディ。上司からミントンをサボっていると見なされては、よく土方にボコボコにされているが、地道に任務をこなして組織を支える縁の下の力持ち。

）真選組のナンバー2であり、規律を厳格に守らせることから隊士たちに恐れられる「鬼の副長」。常にヘビースモーカーでタバコを咥えている。クールでプライドが高く、理知的に見えるが、その本質は非常に不器用で仲間想いな熱い男である。最大の特徴は、あらゆる料理に「土方スペシャル」と呼ばれるほど大量のマヨネーズをドバドバとかける極度のマヨラーであること。また、妖刀の呪いによってオタク人格「トッシー」が発現した際には、ヘタレな美少女フィギュアオタクに変貌した。好物はマヨネーズ。趣味はタバコ、読書。トッシー状態の時はフィギュア収集やアニメ鑑賞、ゲーム。沖田からの容赦ない暗殺の危機に毎日晒されながらも、真選組を支え続けている。

一番隊隊長を務める、真選組随一の天才剣士。端正なルックスとは裏腹に、その本質は腹黒く冷酷、かつ超ド級の「サディスティック星の王子」。副長の座を虎視眈々と狙っており、隙あらば土方にバズーカをぶっ放すなど容赦ない嫌がらせを日常的に行っている。常にアイマスクを着用して勤務中に昼寝をするなど不真面目に見えるが、頭の回転が非常に速く、状況を冷静に見極める戦闘のプロフェッショナル。ひねくれた性格だが、根底には真選組や近藤への強い忠誠心と仲間想いな一面を秘めている。好物はタバスコや激辛料理。趣味は土方への嫌がらせ、落語鑑賞、サディスティックな遊び、そしていつでもどこでも睡眠を取ることである。

三番隊隊長を務める凄腕の剣士で、真選組の内部粛清役（狼使い）を担う。アフロヘアーがトレードマーク。無口で常に無表情、喋る代わりに「Z」という文字の寝息のような音しか出さないため、周囲からは冷徹で寡黙な暗殺者として恐れられている。しかし実際のところ、その正体は極度の人見知り。他人と喋ろうとすると緊張のあまり頭が真っ白になり、そのまま眠くなって寝てしまうという超内気な性格の持ち主。本当は友達が欲しくてたまらず、内心のモノローグは非常に雄弁でテンションが高い。好物はオレンジジュースや甘い物、アフロにちなんで（？）ラーメン。趣味は「終記」と呼ばれる日記をつけることで、出会った人の名前を細かく記録している。

真選組をまとめる局長。懐が深く、お人好しで人情味溢れる男気を持つため、土方や沖田をはじめとする隊士たちから絶大な信頼と尊敬を寄せられている。しかし私生活では、志村妙に一目惚れして以来、常軌を逸したストーカー行為を繰り返す危険人物に変貌する。作中では「ゴリラ」と称されることが多く、下ネタに走ったり全裸になったりと、ギャグ描写の被害に遭いやすい残念なイケメン。それでも、いざという時には命を懸けて仲間や江戸の街を守る、芯の通った最高の大将である。好きな食べ物はバナナ。趣味はお妙の追っかけ（ストーカー行為）やカブトムシ捕り。周囲を笑顔にするポジティブさと、どんな困難にも折れない圧倒的な包容力が最大の魅力である。