성별:남/마일스 모랄레스는 브루클린 출신의 10대 스파이더맨이다. 거미에게 물려 초능력을 얻었으며, 전기 공격과 투명화, 벽타기, 거미줄 등의 능력을 사용한다.

성별:여/그웬 스테이시는 스파이더우먼으로 활동하는 캐릭터다. 거미에게 물린 뒤 초능력을 얻었으며, 빠른 움직임과 거미줄, 벽타기 등의 능력을 사용한다.

성별:남/피터 B. 파커는 《스파이더맨: 뉴 유니버스》에 등장하는 스파이더맨이다. 오랜 시간 뉴욕을 지켜온 베테랑 히어로지만, 여러 사건을 겪으며 지치고 자신감을 잃은 상태였다. 이후 마일스 모랄레스와 만나면서 다시 스파이더맨으로서의 책임과 희망을 되찾는다. 뛰어난 전투 능력과 스파이더 센스, 초인적인 힘과 민첩성, 벽타기와 거미줄을 사용하는 능력을 가지고 있다.

성별:남/스파이더맨 느와르는 《스파이더맨: 뉴 유니버스》에 등장하는 스파이더맨이다. 1930년대의 어두운 세계에서 활동하는 탐정 같은 스파이더맨으로, 검은 코트와 모자, 마스크를 착용한다. 다른 스파이더맨들과 마찬가지로 뛰어난 신체 능력과 벽타기, 스파이더 센스를 가지고 있으며, 거미줄을 사용해 적과 싸운다. 말수가 적고 진지한 성격이며 어두운 분위기가 특징이다.

성별:남/ 《스파이더맨: 뉴 유니버스》에 등장하는 돼지 모습의 스파이더맨이다. 원래 이름은 피터 포커이며, 만화처럼 과장된 움직임과 유머를 사용해 싸운다. 초인적인 힘과 민첩성, 벽타기, 거미줄 등의 능력을 가지고 있으며, 다양한 물건을 꺼내 공격하는 만화 같은 능력도 보여준다.

성별:여/ 《스파이더맨: 뉴 유니버스》에 등장하는 스파이더맨 캐릭터다. 일본 애니메이션 스타일의 세계에서 활동하며, 거대한 로봇 SP//dr을 조종한다. 페니는 로봇과 정신적으로 연결되어 함께 싸우며, 뛰어난 조종 실력과 빠른 판단력을 보여준다. 밝고 활발한 성격이지만 위기 상황에서는 침착하게 행동하는 모습을 보여준다.

성별:남/ 《스파이더맨: 어크로스 더 유니버스》에 등장하는 악당이다. 원래는 알케맥스의 과학자 조너선 온으로, 실험 사고로 몸 전체가 흰색과 검은 점으로 이루어진 모습이 된다. 몸에 생긴 차원 포털을 이용해 순간이동하거나 공격을 피할 수 있으며, 포털을 통해 다른 장소나 차원으로 이동할 수도 있다. 처음에는 우스꽝스러운 악당처럼 보이지만 점점 강력하고 위험한 존재로 변해간다.

성별:남/《스파이더맨: 어크로스 더 유니버스》에 등장하는 스파이더맨이다. 미래의 스파이더맨인 스파이더맨 2099로 활동하며, 스파이더 소사이어티를 이끄는 인물이다. 뛰어난 힘과 속도, 민첩성, 스파이더 센스를 가지고 있으며 손가락의 발톱 같은 손톱과 날카로운 송곳니도 특징이다. 진지하고 냉정한 성격으로 스파이더맨들의 세계를 지키기 위해 노력한다.

닥터 옥토퍼스는 《스파이더맨: 뉴 유니버스》에 등장하는 악당이다. 본명은 올리비아 옥타비우스로, 알케맥스의 과학자이자 뛰어난 발명가다. 기계식 촉수 4개를 자유롭게 움직이며 강력한 힘과 빠른 공격을 한다. 뉴 유니버스에서는 기존의 닥터 옥토퍼스와 달리 여성 과학자로 등장하며, 스파이더맨을 잡기 위해 다양한 과학 기술을 사용한다.

킹핀은 《스파이더맨: 뉴 유니버스》의 주요 악당으로, 본명은 윌슨 피스크다. 뉴욕의 거대한 범죄 조직을 이끄는 인물이며 엄청난 체격과 강력한 힘을 가지고 있다. 가족을 잃은 뒤 차원을 연결하는 슈퍼 콜라이더를 이용해 다른 차원의 존재를 데려오려 한다. 마일스와 스파이더맨들을 막기 위해 직접 싸우며, 압도적인 힘으로 상대를 몰아붙이는 것이 특징이다.